㈠方法簡(jiǎn)介
采用磺基水楊酸鐵褪色光度法測定時(shí)，在pH4.5的HAc-NH4Ac介質(zhì)中，鐵（III）-磺基水楊酸生成紫紅色配合物，當加入檸檬酸標準溶液后，使紫紅色配合物褪至橙紅。在10~15min內，褪色液的ΔA較大而且穩定。在20℃～30℃溫度時(shí)，△A基本穩定。因而可在常溫下，于470nm波長(cháng)處，根據其ΔA值，測定檸檬酸及其鹽的含量[5]。
文獻[5]認為：褪色吸光度△A之值與檸檬酸的質(zhì)量(m/mg)在一定范圍內成線(xiàn)性關(guān)系。筆者對原數據進(jìn)行處理，兩者的關(guān)系式應為：△A=0.006＋0.877×m檸檬酸－0.248×m2檸檬酸
鍍液里的還原性物質(zhì)，用H2O2氧化避免其干擾。
㈡儀器
⑴分光光度計。
⑵比色皿：1cm。
㈢試劑
⑴H2O2：30%。
⑵HClO4溶液：0.025mol/L。
⑶檸檬酸標準儲備液：10g/L，稱(chēng)2.5000g檸檬酸，用水溶解并定容至250mL。
⑷檸檬酸標準工作液：1g/L，取上述檸檬酸標準儲備液10.0mL，加水定容至100mL。
⑸Fe3+標準溶液：0.01mol/L，稱(chēng)4.8220gNH4Fe(SO4)2·12H2O，用0.025mol/LHClO4溶解，加水定容至1000mL。
⑹磺基水楊酸溶液：0.01mol/L，稱(chēng)磺基水楊酸2.5420g，用0.025mol/LHClO4溶解，加水定容至1000mL。
⑺HAc-NH4Ac緩沖溶液：取冰HAc28mL，加500mL水稀釋?zhuān)缓笥脻獍彼{溶液pH至4.5為止。
㈣校準曲線(xiàn)的制作
⑴在6支25mL比色管依次加入1.0mLFe(III)溶液，4.0mL磺基水楊酸溶液，4.0mL
HAc-NH4Ac緩沖溶液。將其中1支25mL比色管，以水定容至刻度。
⑵在余下的5支25mL比色管中,依次加入1g/L的檸檬酸工作液的mL數各為：0.2、0.4、0.6、0.8、1.0后，以水定容至刻度。
⑶10min后，在470nm處，用1cm比色皿，分別以后5支25mL比色管的褪色液為參比，分別測定出第一支比色管(未加入檸檬酸)溶液的吸光度，即為后5支25mL比色管中褪色液的褪色吸光度△A之值。
⑷以褪色吸光度△A之值為縱坐標，檸檬酸的質(zhì)量(m/mg)為橫坐標，繪制校準曲線(xiàn)。
如圖6-1。
㈤測定步驟
⑴在10mL燒杯中，加入鍍液1.0mL(V1/mL)，蓋上表面皿后，向燒杯中緩緩滴加1~2mL30%的H2O2溶液，放置片刻后，定量轉移到25mL容量瓶(V/mL)中，以水定容后搖勻。
⑵取2支25mL比色管，在1支比色管中，加入稀釋液5mL(V2/mL，控制加入的檸檬酸及其鹽的質(zhì)量在0.2~1.0mg之間）。
⑶在2支25mL比色管中，依次加入Fe(III)溶液1.0mL，磺基水楊酸溶液4.0mL，4.0mLHAc-NH4Ac緩沖溶液。以水定容至刻度后搖勻。
⑷10min后，在470nm處，用1cm比色皿，以加入稀釋液比色管的褪色溶液為參比，測定未加稀釋液比色管溶液的吸光度，從而測得褪色吸光度△A之值。
⑸以測得的褪色吸光度△A之值，在“圖6-1檸檬酸的校準曲線(xiàn)(磺基水楊酸鐵褪色光度法）”上，查出相應的檸檬酸的質(zhì)量(m/mg)。
㈥計算
式中ρ檸檬酸銨—鍍液中檸檬酸銨[(NH4)3C6H5O7]的質(zhì)量濃度，g/L；
243.2—檸檬酸銨[(NH4)3C6H5O7]的相對分子量，1；
192.1—檸檬酸(C6H8O7)的相對分子量，1；
m檸檬酸—顯色液中檸檬酸的質(zhì)量，mg；
V2—吸取稀釋液的體積，mL；
V1—鍍液的取樣體積，mL；
V—容量瓶的標稱(chēng)容積，mL。